Гистологическая обработка гладиусов кальмара

В ходе работы опробованы различные методики размягчения, резки и приготовления препаратов гистологических срезов хитиновых образований беспозвоночных.

Вначале были применены классические методы резки с предварительным размягчением объектов, обезвоживанием и заливкой в парафиновые и целлоидиновые блоки. Для размягчения были использованы две методики: декальцинация азотной кислотой по Шафферу [Ромейс, 1953] и размягчение в ЭДТА (он же комплексон, трилон). Оказалось, однако, что азотная кислота вызывает значительные изменения внутренней структуры (расслоение) гладиуса, а размягчение в ЭДТА протекает очень медленно (неделями) и затрудняет обработку массового материала. Кроме того, в процессе дегидратации и заливки в блоки гладиусы становятся хрупкими и крошатся на срезах. Попытка резать гладиус на криотоме также оказалась неудачной, так как вода, содержащаяся в гладиусе, при замерзании вызывает его расслоение.

Таким образом, традиционные гистологические методики для гладиуса оказались непригодными. К аналогичным результатам пришли и другие исследователи, в разное время пытавшиеся резать гладиусы [Кабанов, 1967; Amaratunga, 1982; Toll, 1982; 1990].

Более удачной оказалась попытка использовать методику приготовления витальных срезов, принятую в ботанике: объект зажимается между кусочками пористого материала, например пробки, и режется вручную [Прозина, 1960]. В результате была разработана методика приготовления срезов гладиуса, отличающаяся предельной простотой и минимально нарушающая внутреннюю структуру раковины. Суть этой методики заключается в следующем.

Резка гладиуса. Гладиус, хранившийся в консерванте, перед резкой отмывают с мылом в проточной воде, а затем ополаскивают. Из гладиуса вырезают фрагменты длиной 2—3 см в тех местах, где необходимо получить срезы. Небольшие гладиусы целиком разрезают на несколько кусков. Фиксация положения гладиуса при резке осуществляется зажатием в блоке из двух кусочков пористого материала (пробки, пенопласта) по модулю сдвига, близкого к модулю сдвига объекта. Для более плотного и равномерного охвата гладиуса и предотвращения его деформации на соприкасающихся поверхностях блока вырезают профиль объекта. Резку производят вручную микротомным ножом или опасной бритвой. При резке необходимо обращать внимание на то, чтобы срез проходил в желаемой плоскости и имел минимальную, одинаковую на всем протяжении толщину — от 40 до 60 микрон. Полученные срезы влажной кисточкой переносят в чашку Петри с водой.